細胞培養離開這幾個條件，成功率極低

　　細胞培養的條件一般離不開這5個(gè)：合适的細胞培養基、優質血清、無菌無毒細胞培養環境、恒定的細胞生長(zhǎng)溫度、合适的氣體環境

　　絕大部分細胞消化的時候是隻要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶後，殘留的那些無法計算體積的附著(zhe)在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對於(yú)這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。

　　不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好瞭(le)，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，隻要能移動瞭(le)，多半呈沙壯移動，其實已經可以瞭(le)，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動瞭(le)，說明細胞與培養基質材料的附著(zhe)已經消失瞭(le)，細胞之間的附著(zhe)也已經消失瞭(le)，細胞已經獨立分布瞭(le)（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化
，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

　　細胞就是*成單個細胞懸液，之後在貼壁的過程中仍然會聚集
，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗(cháng)試，準備(bèi)100%的單個細胞懸液，貼壁後觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集
，不要去嘗(cháng)試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養懸浮細胞的人常犯的錯誤，以爲懸浮培養就是一個一個分開）。細胞隻要能從基質上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次後（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者象有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現。

　　比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以coloncancer爲例，比如HCT15,LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mmdish，一次多加入500ul，就足夠瞭(le)，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動(dòng)，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也隻要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。