細胞培養知識（三）

如何選用特殊細胞系培養基？ 
 

培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個(gè)好的開始，各種目的無血清培養AIM V（12005）培養基（SFM）。

L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？ 
 L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基後，L-谷氨酰胺可作爲培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間後會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-谷氨酰胺的降解導緻氨的形成，而氨對於一些細胞具有毒性。

GlutaMAX-I是什麽？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩定？ 
GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物
，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鍾，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解。

什麽培養基中可以省去加酚紅？
  酚紅在培養基中被用來作爲PH值的指示劑：中性時爲紅色，酸性時爲黃色
，堿性時爲紫色。研究表明
，酚紅可以模拟固醇類激素的作用，（特别是雌激素）。爲避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由於酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。 酚紅在培養基中被用來作爲PH值的指示劑：中性時爲紅色，酸性時爲黃色，堿性時爲紫色。研究表明，酚紅可以模拟固醇類激素的作用，（特别是雌激素）。爲避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由於酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。 如何用台盼蘭計數活細胞？ 用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的台盼蘭溶液
。輕輕混勻，數分鍾後，用血球計數闆計數細胞。活細胞排斥台盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。

如何消除組織培養的污染？
  當重要的培養污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超淨台，檢查HEPA過濾器。 高濃度的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素産生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性黴素B和抗黴菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟
。 1. 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。 2. 分散細胞懸液到多孔培養闆中，或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度範圍内，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性黴素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。 3. 每天觀測細胞毒性指标，如脫落，出現空泡，彙合度下降和變圓。4. 確定抗生素毒性水平後，使用低於毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2～3代。 5. 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。 6. 重複步驟4。 7. 在無抗生素的培養基中培養4～6代，確定污染是否以已被消除。

培養基中丙酮酸鈉的作用是什麽？
  丙酮酸鈉可以作爲細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向於以葡萄糖作爲碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。