如何利用細胞培養瓶進(jìn)行細胞傳(chuán)代操作？

　　細胞傳代是指需要将分割成小的部分，重新接種到另外的培養容器内，再進行培養的過程。細胞培養瓶是細胞通過過程中的一種常見消耗品。那麽這個具體步驟是什麽？

　　

　　1、從(cóng)培養箱中取出細胞培養瓶，用酒精噴壺在瓶身表面噴灑75%的酒精進行消毒，然後(hòu)轉移到超淨台上。

　　

　　2、打開蓋子，輕輕吸出舊的培養液，用巴氏吸管加入适量的PBS緩沖液清洗1-2次，然後丢棄PBS緩沖液。
 

　　

　　3、用吸管加入1-2毫升胰蛋白酶，並(bìng)以"十字"方式搖動
，使胰蛋白酶充分接觸(chù)細胞。

　　

　　4、将裝有胰蛋白酶的細胞培養瓶轉移到倒置的顯微鏡平台上，在顯微鏡下觀察細胞的消化情況。當細胞變圓並(bìng)大量脫落時，準備(bèi)停止消化，用75%的酒精噴灑瓶子表面，然後轉移到超淨台。

　　

　　5、用吸管（或巴氏吸管）加入等量的含血清培養基，終止消化。吸管充分吹氣(qì)，使細胞*脫(tuō)落。

　　

　　6、将瓶中的混合液體轉移到離(lí)心管中，平衡並(bìng)離(lí)心約5分鍾。

　　

　　7、離心後，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉移到超淨台上，打開蓋(gài)子，将上清液倒入廢(fèi)液槽。

　　

　　8、加入适量的含血清的培養基，用吸管吸管輕(qīng)輕(qīng)吹打，使細(xì)胞懸浮。

　　

　　9、将細胞懸液分成2個（或更多）清潔消毒的培養瓶，加入适量的培養基，並(bìng)加蓋(gài)。

　　

　　10、将分裝好的細胞培養瓶放在倒置的顯微鏡台上，觀察細胞。細胞的數量應該(gāi)得到保證。細胞太少會影響生長(zhǎng)。

　　

　　11、在瓶子上做标記，注明通過(guò)時間、細胞類型、操作者和其他信息。放入培養箱前，再次用酒精噴灑瓶體表面，整理操作平台，用75%酒精擦拭超淨台面，清理廢(fèi)液和垃圾。

　　

　　細胞培養瓶操作時(shí)注意穿戴消毒服、手套和口罩，全程注意無(wú)菌操作，避免細胞污染。