細胞培養過(guò)程中遇到的常見問題及解決的辦(bàn)法

　　細胞培養過程中遇到的常見問題及解決的辦法：

　　

　　1、培養(yǎng)液pH值變(biàn)化太快：

　　

　　（1）CO2張力不對;培養瓶蓋擰得太緊;NaHCO3緩沖(chōng)系統緩沖(chōng)力不足；培養液中鹽濃度不正確(què)。細菌、酵母或真菌污染。按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱内CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度爲5％到10％。

　　

　　（2）改用不依賴CO2培養液。松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖(chōng)液至10到25mM終濃度。在CO2培養環境中改用基於(yú)Earle’s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hank’s鹽配制的培養液。丢棄培養物或用抗生素除菌。

　　

　　2、培養液出現沉澱(diàn)，但pH值不變(biàn)：

　　

　　用洗滌劑清洗後殘(cán)留磷酸鹽将培養基成分沉澱下來。冰凍保存培養液。用去離子水反複沖(chōng)洗玻璃器皿，然後除菌。将培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉澱仍然存在，丢棄培養液。

　　

　　3、細胞培養液出現沉澱(diàn)，同時pH發生變(biàn)化
：

　　

　　細(xì)菌或真菌污染//丢棄(qì)培養物或用抗生素除菌。

　　

　　4、培養細(xì)胞不貼(tiē)壁：

　　

　　胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養液中無貼壁因子。縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。分離培養物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養箱
。如發(fā)現支原體污染，丢棄培養物。

　　

　　5、懸浮細胞成簇：

　　

　　細胞培養液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA。用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。分離培養物，檢測(cè)支原體。如發現支原體污染，丢棄培養物。用DNase處(chù)理細胞。

　　

　　6、原代細(xì)胞培養(yǎng)物污染：

　　

　　原代培養組織在進入培養前已污染。培養前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反複(fù)沖(chōng)洗組織。